ELISA酶聯(lián)免疫吸附實驗是將已知的抗原或抗體結(jié)合在固相載體表面，然后利用酶標(biāo)記（偶聯(lián)）的抗體或抗原與之孵育，在通過顯色物顯色，其顯色深淺與待測物質(zhì)的含量成正比，用肉眼即可觀察。在ELISA實驗中，有三種必需的試劑：已知的抗原或抗體（用于結(jié)合到固相載體上）；酶標(biāo)的抗體或抗原（標(biāo)記物）；顯色劑（用于顯色）。
常見的ELISA實驗有四種：直接ELISA、間接ELISA、夾心ELISA和競爭ELISA。

直接ELISA (Direct ELISA)

直接ELISA法是將抗原固定于ELISA板上，然后用酶標(biāo)抗體直檢測抗原。
相較于其它類型的ELISA實驗，直接ELISA實驗步驟少，檢測速度快，不需要用到二抗，避免了交叉反應(yīng)，測定結(jié)果不容易出錯。但是由于直接ELISA的抗原不是特異性固定的，樣本中的所有蛋白質(zhì)（靶蛋白及其他雜質(zhì)蛋白）都會與ELISA板結(jié)合，實驗背景會比較高。而且直接ELISA每種靶蛋白都需要準(zhǔn)備能夠與其特異性結(jié)合的一抗，實驗不太靈活。另外由于沒有使用二抗，信號沒有被放大，降低了測定的靈敏度。
對抗原的免疫反應(yīng)進行分析，通常會使用直接ELISA。

總結(jié)：

間接ELISA (Indirect ELISA)

間接ELISA法是先將抗原結(jié)合到ELISA板上，隨后分兩步進行檢測：首先加入檢測抗體與抗原特異性結(jié)合，隨后加入酶標(biāo)二抗檢測并利用底物顯色。
與直接ELISA相比，間接ELISA用到酶標(biāo)二抗，具有更高的靈敏度，也需要更少的標(biāo)記抗體，更經(jīng)濟。間接ELISA還提供了更大的靈活性，因為不同的一抗能夠與單一標(biāo)記的二抗一同使用。間接ELISA實驗的缺點是存在交叉反應(yīng)的可能性（酶標(biāo)二抗直接與抗原結(jié)合），可能會增加背景，同時與直接ELISA相比，間接ELISA實驗多了二抗孵育的步驟，實驗周期增長。
間接ELISA法適合測定樣品中總抗體的濃度。

總結(jié)：

夾心ELISA (Sandwich ELISA)

夾心ELISA實驗需要用到配對抗體（捕獲抗體和檢測抗體），其實驗原理是將捕獲抗體結(jié)合到ELISA板上，通過捕獲抗體固定抗原，隨后通過直接ELISA或間接ELISA的方式進行檢測，實驗流程如下圖所示。在夾心ELISA實驗中，最重要的是對配對抗體進行驗證，確保配對抗體能同時與抗原結(jié)合，以確保實驗的順利進行。
夾心ELISA實驗先將捕獲抗體固定于ELISA板孔中，然后加入分析物或樣品，接著加入檢測抗體。如果檢測抗體是酶標(biāo)抗體，則可稱為直接夾心ELISA；如果檢測抗體不帶有標(biāo)記，則還需要使用酶標(biāo)二抗與檢測抗體結(jié)合，這種稱為間接夾心ELISA。夾心ELISA的靈敏度高，它比直接或間接ELISA敏感2-5倍；同時夾心ELISA使用兩種特異性抗體與抗原結(jié)合，擁有很高的特異性。另外夾心ELISA能夠通過直接或間接的方式進行檢測，有著不錯的靈活性。夾心ELISA的缺點是對配對抗體要求很高，如果沒有標(biāo)準(zhǔn)化的試劑盒或者已經(jīng)通過測試的配對抗體，則需要進行配對抗體定制并進行優(yōu)化，因為降低捕獲抗體與檢測抗體之間的交叉反應(yīng)是非常重要的。
夾心ELISA尤其適用于復(fù)雜樣品的分析，因為抗原不經(jīng)純化仍具能有高靈敏度和特異性（例如測量免疫應(yīng)答中的細胞因子水平）。

總結(jié)：

競爭ELISA (Competition ELISA)

競爭ELISA也成為阻斷ELISA，是所有ELISA實驗中最復(fù)雜的，但是以上介紹的三種ELISA類型都適用于競爭ELISA的形式。競爭ELISA主要用于通過檢測對預(yù)期信號輸出去測量樣品中抗原或抗體的濃度：
在競爭ELISA實驗中，樣品中的抗原或抗體競爭性的結(jié)合特定數(shù)量的酶標(biāo)抗體或抗原。樣品中抗原濃度越高，輸出信號越弱，信號輸出與樣品中抗原的量成反比。

總結(jié)：