iTRAQ/ TMT技術(shù)服務(wù)

iTRAQ（isobaric tags for relative and absolute quantitation）技術(shù)是一種多肽體外標(biāo)記技術(shù)。該技術(shù)采用4-plex或8-plex同位素的標(biāo)簽，通過特異性標(biāo)記多肽的氨基基團(tuán)，進(jìn)行LC-MS/MS分析，可同時(shí)比較多種不同樣本中蛋白質(zhì)的相對(duì)表達(dá)含量。

TMT(Tandem Mass Tag)技術(shù)也是一種多肽體外標(biāo)記的方法，采用2-plex、6-plex或10-plex同位素的標(biāo)簽，通過特異性標(biāo)記多肽的氨基基團(tuán)，然后進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜分析，可同時(shí)比較2組、6組或10組不同樣品中蛋白質(zhì)的相對(duì)含量。

iTRAQ是由AB SCIEX公司研發(fā)的一種體外同重同位素標(biāo)記的相對(duì)與絕對(duì)定量技術(shù); TMT技術(shù)是由美國(guó)Thermo Scientific公司研發(fā)的一種多肽體外標(biāo)記技術(shù)。TMT與iTRAQ試劑在結(jié)構(gòu)和檢測(cè)原理上基本類似，都是由報(bào)告基團(tuán)、平衡基團(tuán)和肽反應(yīng)基團(tuán)三部分組成。

服務(wù)內(nèi)容

服務(wù)	要求	交付	周期
iTRAQ/ TMT	干冰運(yùn)輸 詳細(xì)要求見樣品要求	蛋白鑒定及定量結(jié)果表 肽段鑒定及定量結(jié)果表 差異蛋白結(jié)果表 生物信息學(xué)分析結(jié)果 質(zhì)譜原始數(shù)據(jù) 實(shí)驗(yàn)報(bào)告	5-7周

服務(wù)流程

該圖顯示了iTRAQ/TMT定量蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本流程。

第一步，從樣品中提取蛋白。

第二步，對(duì)提取后的蛋白樣品進(jìn)行還原烷基化處理，打開二硫鍵以便后續(xù)步驟充分酶解蛋白。

第三步，用Brandford法進(jìn)行蛋白的濃度測(cè)定。

第四步，SDS（十二烷基磺酸鈉）-PAGE。

第五步，取等量蛋白Trypsin酶解。

第六步，用iTRAQ/TMT試劑標(biāo)記肽段。

第七步，將標(biāo)記后的肽段進(jìn)行等量混合。

第八步，對(duì)混合后的肽段使用強(qiáng)陽(yáng)離子交換色譜（Strong Cation ExchangeChoematography，SCX）進(jìn)行預(yù)分離。

第九步，通過Orbitrap Fusion Lumos分析鑒定。

iTRAQ/TMT定量蛋白組學(xué)分析技術(shù)優(yōu)點(diǎn)

• 高通量：8-plex iTRAQ和10-plex TMT可同時(shí)標(biāo)記最多8組或10組樣本；
• 靈敏度高：低豐度蛋白也能檢出；
• 定量準(zhǔn)確：不同標(biāo)記的肽段等量混合后上機(jī)，避免技術(shù)誤差，提高檢測(cè)效率。
• 所采用的標(biāo)本來源廣泛，除培養(yǎng)細(xì)胞、組織外，還包括血清/血漿、唾液、腦脊液、鼻分泌物和淚液等。

樣品要求

樣本類型	要求
組織樣品	動(dòng)物樣本＞200mg，植物樣品＞1g，酵母、微生物等干重200mg
細(xì)胞樣品	1X107個(gè)細(xì)胞
蛋白樣品	蛋白類樣品≥500 μl, 濃度≥1 μg/μl;肽段樣品≥50 μg; 蛋白提取時(shí)使用普通的組織、細(xì)胞裂解液即可
co-IP樣品	蛋白需求量在2-5ug左右，在寄送蛋白樣品中不要包含去污劑（例如SDS）以及高的氧濃度
血液樣品	＞1ml(血漿注意用EDTA防凝)，血清≥0.2-0.5ml，解凍后血細(xì)胞會(huì)破裂，蛋白溶出來會(huì)影響分析，因此一般不建議送全血。如直接送提取好的蛋白，請(qǐng)去除高豐度，并附上去除高豐度前后的膠圖。
其他體液	尿液≥2ml，唾液≥500ul、腦脊液≥1ml、淚液≥0.1ml、支氣管灌洗液≥23ml
注意：-80℃保存，干冰運(yùn)輸