N端測序–Edman降解法

Edman化學(xué)降解法是蛋白質(zhì)N-端測序技術(shù)的關(guān)鍵技術(shù)，其基本原理是包括通過異硫氰酸苯脂（PITC）與蛋白質(zhì)的N-端殘基的偶聯(lián)，苯氨基硫甲酰酞（PTC-肽）環(huán)化裂解，和噻唑呤酮苯氨（ATZ）轉(zhuǎn)化為苯異硫尿氨基酸（PTH-氨基酸）三個主要的化學(xué)步驟，每個循環(huán)從蛋白質(zhì)N端裂解一個氨基酸殘基，同時暴露出新的游離的氨基酸進行下一個Edman降解，然后通過轉(zhuǎn)移的PTH-氨基酸鑒定實現(xiàn)蛋白質(zhì)序列的測定。

盡管Edman法技術(shù)已應(yīng)用較多，但仍有不足之處，這導(dǎo)致此種方法的檢測成功率不足50%。一般原因是Edman降解法對于樣品的純度濃度要求高并且不能解決N端封閉的測序問題（環(huán)化、封閉）、被修飾的蛋白不能給出確切的信號等。銘研生物在此技術(shù)基礎(chǔ)上加入質(zhì)譜法，質(zhì)譜法不受N末端封閉的限制，能對側(cè)鏈基團翻譯后加工或化學(xué)修飾進行定位，靈敏度有提高，因而具有區(qū)別于傳統(tǒng)Edman降解法的優(yōu)點。

相關(guān)服務(wù)鏈接：N端測序—基于質(zhì)譜分析

Edman原理圖：

服務(wù)流程

注：對于純度＞95%以上的蛋白樣品，可直接點膜上機檢測

服務(wù)內(nèi)容

項目名稱	項目內(nèi)容	項目交付	項目周期
蛋白轉(zhuǎn)膜	蛋白轉(zhuǎn)至PVDF膜	完整的項目結(jié)題報告	1-2周
氨基酸N端測序	一次可測定20-40個氨基酸

樣品要求

• 樣品狀態(tài)：可以是干粉，溶液（不接受PVDF膜樣品）；
• 樣品濃度及純度：總量>200ug 純度>90% 濃度>0.5mg/ml；
• 如需測試氨基酸個數(shù)比較多，建議總量在2mg-3mg，純度95%或以上，濃度1mg/ml
• 含鹽量：揮發(fā)性無機鹽< 20 mM, 不揮發(fā)性無機鹽< 5mM, 建議不使用Tris緩沖體系，建議提供樣品的理論序列
• 測序樣品不返還，請保留備份