單克隆抗體，你可能已經(jīng)了解關(guān)于它的諸多信息，也可能在研究中經(jīng)常使用。1975年，Kohler和Milstein開創(chuàng)了經(jīng)典的雜交瘤技術(shù)，生產(chǎn)單抗。用您需要產(chǎn)生抗體的物質(zhì)（抗原）免疫小鼠，然后獲取小鼠的脾細(xì)胞并與特殊的骨髓瘤細(xì)胞融合，使其變成永生化的雜交瘤細(xì)胞，可分泌產(chǎn)生抗體。目前，這項(xiàng)技術(shù)仍然被用于生產(chǎn)具有精確特異性和無限量的單抗。盡管它有這些吸引人的功能，但用這種方法生產(chǎn)的單抗仍具有一些不可忽視的缺陷。對此，幸運(yùn)的是，重組抗體的到來改變了原有單抗生產(chǎn)的世界，并克服了相應(yīng)的缺陷，為什么會(huì)這樣？請繼續(xù)閱讀吧！
通常，對于研究人員來說，確定哪種抗體適合您的研究是項(xiàng)目啟動(dòng)的第一步。有許多因素需要考慮，包括需要抗體量，抗體的應(yīng)用和對抗體特異性的要求。單抗和多抗有著各自的優(yōu)缺點(diǎn)和適用性，在選擇時(shí)，除了要考慮抗體的應(yīng)用之外，還要考慮宿主是否適合。
首先，什么是重組抗體？
以編碼抗體的基因作為起始材料，利用重組DNA技術(shù)，在體外生產(chǎn)的抗體，
超出了免疫系統(tǒng)的限制。通過獲得抗體的基因序列，構(gòu)建表達(dá)載體，并將其轉(zhuǎn)入至表達(dá)宿主中（如酵母、哺乳動(dòng)物細(xì)胞或細(xì)菌中）。利用這種方式，生產(chǎn)的抗體是特定種類（IgG/IgA/IgE/IgD/IgM)的抗體。同時(shí)，不僅可以生產(chǎn)全長抗體，也可以生產(chǎn)各類抗體片段，如scFv,Fab等。
那么，重組抗體克服了雜交瘤單抗的哪些缺點(diǎn)？
- 時(shí)間上：重組抗體只需數(shù)周（少至4周）；而雜交瘤單抗至少數(shù)月（少至4月）
- 成本上：重組抗體經(jīng)濟(jì)高效，尤為適合高通量生產(chǎn)抗體；而雜交瘤長期大量生產(chǎn)抗體成本相當(dāng)昂貴
- 批間差：重組抗體由編碼它的基因決定，更可靠，具有高度的批次間一致性；而雜交瘤穩(wěn)定性差，批次間不具備一致性
- 穩(wěn)定性：雜交瘤細(xì)胞可能會(huì)丟失，重新制備耗時(shí)耗力。而對于重組抗體來說，你需要的只是一個(gè)蛋白表達(dá)平臺
- 應(yīng)用上：重組抗體可規(guī)避鼠單抗引發(fā)的人體免疫反應(yīng)。即使是人源化的雜交瘤抗體，也會(huì)被人體的免疫系統(tǒng)判定是外來的，會(huì)引起超敏反應(yīng)
- 生產(chǎn)能力：重組抗體不僅可以生產(chǎn)全長抗體，也可生產(chǎn)Fab/scFv/sdAb等抗體片段，且易在多種宿主中表達(dá)
- 抗體工程：重組抗體可通過抗體工程技術(shù)改造，例如提高抗體親和力，抗體人源化等
- 抗體片段：重組抗體可以以多種形式產(chǎn)生，如Fab片段，scFv單鏈抗體，sdAb單域抗體等
- 動(dòng)物福利：重組抗體不需要使用動(dòng)物，克服了對動(dòng)物的倫理問題
- 純化：重組抗體純化需要的抗原更少
如何開發(fā)重組抗體？
對于重組抗體的開發(fā)，一般有幾種方法：通過噬菌體展示，B細(xì)胞克隆及雜交瘤測序。
噬菌體展示技術(shù)
噬菌體展示技術(shù)是將單鏈抗體（scFv）或抗原結(jié)合片段（Fab）展示于噬菌體表面，并構(gòu)建數(shù)百萬甚至數(shù)十億個(gè)展示出抗體片段的噬菌體，從而建立起一個(gè)抗體文庫（Antibody library）。得到一個(gè)數(shù)以千計(jì)的噬菌體文庫，每個(gè)噬菌體攜帶不同的抗體，如何才能篩出那個(gè)展示你想要抗體的噬菌體呢？這就是通過淘選，經(jīng)過數(shù)輪的“吸附-洗脫-擴(kuò)增”，最終分離出具有最高親和力和穩(wěn)定性的展示抗體的噬菌體。對所選的抗體進(jìn)行測序，再利用重組技術(shù)即可大量生產(chǎn)。銘研可以提供重組抗體的生產(chǎn)，詳情可與我們聯(lián)系。
B細(xì)胞克隆
通過免疫動(dòng)物，分離獲得漿細(xì)胞，使用流式細(xì)胞術(shù)將它們彼此分離。 篩選分離的細(xì)胞以找到產(chǎn)生所需抗體的克隆，并擴(kuò)增克隆的基因，克隆到表達(dá)載體中，通過ELISA篩選表達(dá)較好的克隆。 然后進(jìn)行測序，利用體外重組技術(shù)生產(chǎn)抗體。
雜交瘤測序
通過對已有的雜交瘤細(xì)胞測序，獲得抗體的基因序列，即可利用體外重組技術(shù)表達(dá)抗體。
一旦開發(fā)出重組抗體，即可快速大量生產(chǎn)，并且具有比普通單抗/多抗更好的結(jié)合活性。雖然這些開發(fā)過程非常復(fù)雜，耗時(shí)且，但是如果您在長期內(nèi)需要多次使用（比如IVD抗體開發(fā)），你會(huì)發(fā)現(xiàn)，它具有極大的成本效益，一次開發(fā)，終身受益！