重組抗體開(kāi)發(fā)

重組抗體，是使用重組DNA技術(shù)在體外構(gòu)建，不受免疫系統(tǒng)限制而生產(chǎn)的單克隆抗體。因其克服了雜交瘤單抗的諸多缺陷，而成為研究的熱門(mén)。重組抗體的開(kāi)發(fā)是一項(xiàng)困難又復(fù)雜的任務(wù)，南京銘研生物在重組抗體開(kāi)發(fā)方面具有豐富的經(jīng)驗(yàn)，我們可以從多種渠道開(kāi)發(fā)獲得抗體序列，以進(jìn)行重組抗體生產(chǎn)。

重組抗體開(kāi)發(fā)的三種方法

目前，重組抗體的開(kāi)發(fā)主要可以通過(guò)三種途徑：① 通過(guò)噬菌體展示篩選；② 已有雜交瘤細(xì)胞測(cè)序；③直接B細(xì)胞克隆。開(kāi)發(fā)的目的不僅是為了獲得抗體，而是可以測(cè)得抗體的基因序列，以便后續(xù)的抗體生產(chǎn)和改造。

噬菌體展示技術(shù)

噬菌體展示技術(shù)是將scFv單鏈抗體或Fab展示于噬菌體表面的抗體庫(kù)（Antibody library）制備技術(shù)?？贵w庫(kù)結(jié)合固相化技術(shù)和高通量篩選，可以方便快捷地得到親和力較高的抗體，并對(duì)噬菌體進(jìn)行測(cè)序以獲得抗體序列。
噬菌體展示實(shí)驗(yàn)流程：

1. 從小鼠B淋巴細(xì)胞中擴(kuò)增全套抗體的輕鏈和重鏈基因，并構(gòu)建到噬菌體載體上，使噬菌體載體可以表達(dá)該抗體；
2. 數(shù)百萬(wàn)甚至數(shù)十億個(gè)展示抗體片段的噬菌體，每個(gè)噬菌體攜帶不同的抗體，建立起一個(gè)抗體文庫(kù)；
3. 采取固相或液相化的抗原與抗體庫(kù)孵育，經(jīng)過(guò)數(shù)輪的“吸附-洗脫-擴(kuò)增”，篩選特異性抗體（抗體篩選的方法有多種，詳細(xì)可參考：抗體庫(kù)的篩選）；
4. 篩選分離具有高親和力和穩(wěn)定性的抗體并進(jìn)行噬菌體測(cè)序，獲得抗體序列，以此完成重組抗體的開(kāi)發(fā)。

雜交瘤細(xì)胞測(cè)序

對(duì)已有的雜交瘤細(xì)胞測(cè)序，也是快速獲得抗體序列的方法之一。雜交瘤細(xì)胞染色體易丟失，造成雜交瘤細(xì)胞退化，再次構(gòu)建費(fèi)時(shí)費(fèi)力，通過(guò)對(duì)其測(cè)序，可以獲得抗體基因序列，以便長(zhǎng)期保存，并隨時(shí)生產(chǎn)。
雜交瘤細(xì)胞測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程：

1. 提供雜交瘤細(xì)胞，利用RACE技術(shù)獲取mRNA;
2. RT-PCR獲得cDNA，并擴(kuò)增抗體的輕鏈和重鏈基因；
3. 抗體基因連接至T載體，并挑選陽(yáng)性克??；
4. 測(cè)序獲得抗體基因序列，并進(jìn)行生物信息學(xué)分析。

B細(xì)胞克隆

B細(xì)胞克隆是另一種開(kāi)發(fā)重組抗體的方法。噬菌體展示技術(shù)依賴(lài)于重鏈和輕鏈的體外重組，產(chǎn)生和篩選在體內(nèi)未發(fā)現(xiàn)的抗體。而直接B細(xì)胞克隆則保留了原始的重鏈和輕鏈抗體對(duì)。但是B細(xì)胞克隆需要使用整個(gè)B細(xì)胞進(jìn)行開(kāi)發(fā)，從新分化的B細(xì)胞一直到完全分化的B細(xì)胞（完全分化的B細(xì)胞是經(jīng)過(guò)抗原刺激產(chǎn)生的漿細(xì)胞），而漿細(xì)胞僅占B細(xì)胞的0.1-1.0％，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)可以篩選獲得分泌特異性抗體的漿細(xì)胞。
B細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)流程：

1. 免疫動(dòng)物（兔/鼠），并檢測(cè)血清ELISA效價(jià)；
2. 一只動(dòng)物的加強(qiáng)免疫并利用流式細(xì)胞術(shù)分離獲得單個(gè)漿細(xì)胞（96孔板每孔一個(gè)細(xì)胞）；
3. 擴(kuò)增每孔細(xì)胞的抗體的輕鏈和重鏈的基因序列，并克隆到哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)載體中；
4. 哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)該抗體并通過(guò)間接ELISA篩選最優(yōu)效價(jià)的克??；
5. 克隆的質(zhì)粒測(cè)序并獲得抗體的基因序列。

結(jié)論

一旦完成重組抗體的開(kāi)發(fā)，即可進(jìn)行大量生產(chǎn)，并且提供比雜交瘤抗體更可靠的活性。雖然開(kāi)發(fā)過(guò)程復(fù)雜耗時(shí)且價(jià)格較為昂貴，但是當(dāng)您在研究中需要長(zhǎng)期多次使用時(shí)，重組抗體將會(huì)大大節(jié)約您的時(shí)間與成本。