通常，對(duì)于研究人員來說，選擇單抗還是多抗作為您的研究是項(xiàng)目啟動(dòng)的第一步。有許多因素需要考慮，包括需要抗體量，抗體的應(yīng)用和對(duì)抗體特異性的要求。單抗和多抗有著各自的優(yōu)缺點(diǎn)和適用性，在選擇時(shí)，除了要考慮抗體的應(yīng)用之外，還要考慮宿主是否適合。
單抗多抗的區(qū)別
概念:
- 單克隆抗體：由單一B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的高度均一、僅識(shí)別某一特定抗原表位的抗體。
- 多克隆抗體：用一種含有多種抗原決定簇的抗原免疫動(dòng)物，可刺激機(jī)體產(chǎn)生多個(gè)B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生針對(duì)多種抗原表位的不同抗體。所獲得的免疫血清是含有多種抗體的混合物。
單抗多抗制備流程：
- 單抗制備：抗原免疫動(dòng)物→獲得B淋巴細(xì)胞→B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合→獲得雜交瘤細(xì)胞→HAT培養(yǎng)基篩選成功融合的雜交瘤細(xì)胞→亞克隆獲得單克隆→挑選最好的克隆進(jìn)行放大培養(yǎng)→獲得單克隆抗體
- 多抗制備：抗原免疫動(dòng)物→收集血清→純化獲得多克隆抗體
單抗VS. 多抗
| 抗體類型 | 優(yōu)點(diǎn) | 缺點(diǎn) | 免疫宿主 |
|---|---|---|---|
| 單克隆抗體 |
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| 多克隆抗體 |
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單抗成本高，周期長，但特異性好；多抗成本低，周期短，但特異性不及單抗。如果您時(shí)間緊迫，費(fèi)用有限，但又需要特異性高的抗體，單特異性抗體可能是您最好的選擇（詳細(xì)了解單特異性抗體，請(qǐng)與我們聯(lián)系）。
猜你想讀：一抗or二抗該如何選擇？
免疫宿主的選擇
| 宿主 | 優(yōu)點(diǎn) | 缺點(diǎn) | 適用生產(chǎn) |
|---|---|---|---|
| 小鼠 |
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| 大鼠 |
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| 兔 |
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| 山羊 |
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| 雞 |
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| 駱駝 |
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抗體的應(yīng)用
酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn) (ELISA)
ELISA的實(shí)驗(yàn)原理是基于抗體/抗原的特異性結(jié)合，它不僅能夠?qū)μ囟ǖ牡鞍走M(jìn)行定量分析，還可以研究分子之間的相互作用或其他特性。將針對(duì)靶蛋白的抗體與酶偶聯(lián)。在加入底物時(shí)，這種酶催化底物生成有色產(chǎn)物。通過分光光度計(jì)的測定，便可以知道樣品中抗原的濃度。常見的ELISA類型有四種：直接ELISA，間接ELISA，夾心ELISA和競爭ELIS。
WB通常被用來確定樣品間蛋白的相對(duì)表達(dá)水平，還可以確定目標(biāo)蛋白的分子量大小，這有利于我們對(duì)蛋白的翻譯后修飾過程進(jìn)行研究。根據(jù)分子量大小的不同，通過凝膠電泳分離蛋白質(zhì)。接著，將蛋白被轉(zhuǎn)移到PVDF/NC膜上，隨后用抗體來檢測，確定樣品中蛋白的含量。
免疫沉淀是分離純化單一或復(fù)合蛋白的最常用的一種方式。抗體被固定在固相基質(zhì)上（如磁珠），從復(fù)雜溶液中捕獲抗原。免疫共沉淀，是在捕獲抗原的同時(shí)，驗(yàn)證溶液中是否存在具有相互作用的物質(zhì)。
免疫組化是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原，對(duì)其進(jìn)行定位、定性及定量的研究。相比與WB和ELISA，它的定量分析應(yīng)用較少，但是在完整組織中對(duì)于蛋白表達(dá)的分析更有優(yōu)勢。IHC染色是通過抗體識(shí)別靶蛋白實(shí)現(xiàn)的。抗原抗體復(fù)合物能夠通過酶促反應(yīng)或者熒光來實(shí)現(xiàn)可視化。這些底物可以直接偶聯(lián)到一抗或二抗上。
ICC通常使用熒光標(biāo)記的抗體來研究蛋白的亞細(xì)胞分布。與IHC相比，該技術(shù)提供了更高的空間分辨率，因?yàn)榕囵B(yǎng)的細(xì)胞不會(huì)有組織樣本的復(fù)雜環(huán)境。
流式細(xì)胞術(shù)（FCM）和細(xì)胞分選（FACS）
流式細(xì)胞術(shù)是一種在細(xì)胞分子水平上通過單克隆抗體對(duì)單細(xì)胞或其他生物粒子進(jìn)行定量分析和分選的檢測手段。它可以高速分析上萬個(gè)細(xì)胞，并能同時(shí)從一個(gè)細(xì)胞中測得多個(gè)參數(shù)，包括細(xì)胞大小和細(xì)胞表面以及細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記物的表達(dá)量。細(xì)胞分選（FACS）是一種更復(fù)雜的系統(tǒng)，將細(xì)胞從多細(xì)胞樣品中分離出來。該方法用抗體標(biāo)記細(xì)胞，同時(shí)被用的抗體被熒光標(biāo)記或連接免疫磁珠，利用熒光和免疫磁珠的特性來分離細(xì)胞。